烏鴉 asked in 科學生物學 · 7 years ago

酵母菌雙雜合

請解釋一下什麼是"酵母菌雙雜合系統"

原理是什麼?

具體的做法是什麼?

可以用來做什麼?

為什麼要用酵母菌?

請不要貼維基百科謝謝

已經看過還是看不懂才問的

Update:

交互作用是指兩蛋白質(A蛋白與B蛋白)相結合的意思嗎?

根據wiki的圖AD與BD不需要真正結合,只需要很靠近就可以嗎?

此方法只能證明待測蛋白質是否會進行交互作用嗎?有辦法得知是哪方面的交互作用嗎?

待測蛋白質是否有限制?(蛋白大小or必須為DNA轉錄過程相關的蛋白...etc)

2 Answers

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  • 7 years ago
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    既然你看過wiki 那我們就用wiki的圖來解釋吧

    Yeast Two Hybrid這一個實驗方法 主要是在研究蛋白質之間的交互作用

    早期是用酵母菌的Gal4系統來做這項研究(也就是你wiki上面可以看到的圖)

    Gal4 這一個轉錄因子會結合上基因上游的活化序列(upstream activating sequence, UAS)來啟動下游的Lac Z基因活化表達,產生蛋白質。

    Gal4這一個轉錄因子蛋白質具有兩個功能區域(functional domain),分別稱作AD和BD,蛋白質的BD區域負責和UAS結合;AD區域負責激活下游的基因調控,因此如果只有單純的AD區域或BD區域是沒有辦法引發lac Z基因活化的。

    所以科學家們就藉著這個調控機轉,設計出了Yeast 2 hybrid的實驗方法,首先先將要研究的兩種蛋白質的基因序列分別接在plasmid上,這兩個序列後面都各自帶有AD和BD的序列。

    示意圖如下

    A plasmid

    -------A蛋白基因序列------AD------------

    B plasmid

    -------B蛋白基因序列-------BD------------

    這樣的設計讓A蛋白基因序列再轉譯成蛋白質的時候會額外多帶一段AD的蛋白序列,同理B蛋白基因序列也會多帶BD蛋白序列。

    之後將這兩個plasmid送入兩株可以互相mating 的yeast當中(Mat-alpha, Mat-beta),之後進行yeast的mating ( Yeast交配行為的一種,有點像兩個細胞融合再一起的動作,yeast體內的所有基因體、蛋白質、胞器等都混和再一起 ),mating完之後再用特殊的培養基篩選,假使A蛋白和B蛋白彼此有interaction,那麼他們上面分別帶的AD和BD兩個功能序列也會因此靠得很近,下游的lac Z基因被激活表達(就像是AD和BD在同一條蛋白質上面一樣),因此在特殊培養基上面就可以被挑出來(ex: 藍白挑)

    Yeast 2 hybrid 的方法發展至今已經不限於在yeast上面才可以做了,不過會在yeast上面做就我的認知可能有下面幾點理由,yeast是真核生物當中較好操作的模式生物,假使要研究人類等真核生物蛋白質的交互作用,普遍認為用同樣是真核生物來研究比較不會失真( 真核原核的蛋白質摺疊、修飾等等不一定一樣 )、交配方式也適合做這樣的實驗等。

    2013-06-04 11:48:25 補充:

    >交互作用是指兩蛋白質(A蛋白與B蛋白)相結合的意思嗎?

    理論上是的,但其實不一定是A蛋白和B蛋白直接結合,也有可能是A接上C,B也會接上C,所以形成了ACB complex,這樣子實驗做出來就會變成偽陽性,在之後的驗證實驗就可能會遇到一些問題。

    >根據wiki的圖AD與BD不需要真正結合,只需要很靠近就可以嗎?

    是的,所以也有可能AD和BD所連接的蛋白質彼此間沒有interaction,但還是產生陽性反應(AD和BD因為不知名原因靠得很近,啟動下游反應)

    2013-06-04 11:53:30 補充:

    >此方法只能證明待測蛋白質是否會進行交互作用嗎?有辦法得知是哪方面的交互作用嗎?

    改變你接上去待測物的序列位置,比如說第一組接1-100,第二組接100-200,這樣可以看說是哪個序列位置有陽性反應的,不過這樣實驗也會有限制(切下來的蛋白質區域折疊的時候也要跟原始蛋白質一樣,如果摺疊不一樣就沒有辦法反映真實情況),所以這樣的實驗限制也有點多。

    >待測蛋白質是否有限制?(蛋白大小or必須為DNA轉錄過程相關的蛋白...etc)

    這邊的話我就不太清楚哩,不過就我所知只要懷疑有可能有interaction 的非膜蛋白應該都可以試試(膜蛋白的話可能要在設計過,不然疏水位置可能會影響)

    Source(s): 我+wiki, 我, 我
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  • Anonymous
    6 years ago

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