Anonymous
Anonymous asked in 科學生物學 · 9 years ago

請問:"in frame cloning"是什麼意思?

請問生物技術中的

in-frame cloning是什麼意思?

in-frame翻成中文該如何表示?

請高手幫忙回答

愈詳細愈好,希望能舉個例

謝謝!

Update:

blue colonies may contain the insert. This occurs when the insert is "in frame" with the LacZα gene and it does not have a STOP codon. This could sometimes lead to the expression of a fusion protein that is still functional as LacZα.

請問上面這段文字是在說什麼呢? 謝謝!

Update 2:

謝謝你!幫我回答了這麼多

此時若你的plasmid中恰好含有LacZα(無LacZΩ)時,此兩小段蛋白並可結合成一完整的多套體執行酵素功能,使其呈"白色"!! 這應該是藍色對吧!

請問原文來源是?

2 Answers

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  • 菲菲
    Lv 4
    9 years ago
    Favorite Answer

    In-frame cloning 的 cloning 為基因轉殖之技術 之意

    In-frame cloning 的frame 出自於基因轉譯之open reading frame

    (基因轉譯蛋白質之完整單位;框架,為三個codon的整數倍,

    因三個codon才可決定一 amino acid ,

    當然一定也含有的initiation codon & termination codon ) 而在此In-frame 之意為其實也沒什麼,就是將轉殖於 exon

    之位置的意思,因此這通常不會來敘述原核,

    因為原核可沒有intron , exon 的問題 !! 舉例的話太多了,基本上我們只要把有興趣之基因

    轉載上真核之exon之位置均算,

    而殖入intron 或 其他的 promoter ,enhancer 則不算 !!(有時也會殖入非exon之部分,因為要研究其功能)

    2010-08-21 01:02:04 補充:

    藍白篩選中,若你的insert 成功插入了lacZ gene 中的話,照理來說就會破壞了原本的

    β-galactosidase gene , 使其做不出完整的酵素而無法代謝lactose(或用來篩選的X-gal)

    最後形成白色clone . (插入insert 失敗則呈藍色)

    2010-08-21 01:02:27 補充:

    但是有時會出偽陽性的現象,俗稱:α-complementation ,也就是說就算是插入insert成功但仍然呈藍色!!

    2010-08-21 01:02:47 補充:

    這是因為lacZ的基因可做出兩個subunit : LacZα and LacZΩ ,其為連在一起的基因,

    兩段做出來的蛋白必須同時存在才能擁有真正的催化能力

    2010-08-21 01:03:16 補充:

    當你插入一段insert時,

    必為破壞其中一部分卻保留了另一部分(LacZα or LacZΩ ),此時,若你的plasmid恰好有著

    你破化掉的那一半時,就會使兩著互補,最後酵素依然有效,仍可作用所以呈藍色 !!

    2010-08-21 01:03:29 補充:

    舉例來說 : 若你插入insert破壞了lacZ gene中的LacZα部分時,你所破壞的lacZ gene 仍可作出

    LacZΩ,但是因為只有酵素的一半因此無作用,

    此時若你的plasmid中恰好含有LacZα(無LacZΩ)時,此兩小段蛋白並可結合成一完整的多套體執行酵素功能,使其呈白色!!

    2010-08-21 01:04:00 補充:

    可見參考原文:

    This enzyme can be split in two peptides, LacZα and LacZΩ, none of which is active by itself but both spontaneously reassemble into a functional enzyme.

    2010-08-21 01:04:10 補充:

    This characteristic is used in many cloning vectors to achieve α-complementation in specific laboratory strains of E. coli, where the small LacZα peptide is encoded by the plasmid while the large LacZΩ is encoded in trans by the bacterial chromosome.

    2010-08-21 01:04:55 補充:

    若還有疑問,再告知我,我會竭我之力幫助您

    2010-08-23 22:51:04 補充:

    是的,是藍色才對!!

    sorry ~

    來源是出自於維基百科:

    http://en.wikipedia.org/wiki/%CE%92-galactosidase

    直接搜尋β-galactosidase 亦可 !!

  • Anonymous
    5 years ago

    到下面的網址看看吧

    ▶▶http://qoozoo09260.pixnet.net/blog

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