黃小碧 asked in 科學其他:科學 · 1 decade ago

為什麼我做蛋白質電泳時,都跑不開??

求救.....為什麼做Western blot時,膠片常常有跑不開的現象??

Protein Marker 只出現這幾條band--170,130,100,70,55,40{有時候40還會沒有} 是因為膠片製作不好還是因為電泳時間有問題呢??

上膠3.9%{60V 20mins};下膠10%{100V,100mins}

Update:

是垂直的...

Protein Marker 是170~10 kDa 的

但是40kDa 沒出現要則麼壓B-actin或GAPDH呢??

如何做loading control??

2 Answers

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  • 1 decade ago
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    是Marker在40kDa以下的band都沒有出現嗎???

    有否可能是因為跑的時間太長...蛋白質跳海了呢???

    不知道你用的是跑小片膠還是大片膠...

    看要不要在電泳進行至下層膠在dye離跳海還有1~2公分的距離時就停止電泳

    你做western時有再做一片coomassie stain做control嗎?

    如果有coomassie stain做control就可以知道是否40kDa以下的產物是否有在膠片上,如果有出現,就可能是marker的品質不良,請換一個新的試試

    照正常情況下以10% acrylamide gel 應該最低到20kDa都可以拉得開

    如果蛋白沒跳海 又coomassie stain在40 kDa以下的產物又染不到的話

    有可能是膠片沒做好 請check Tris buffer的pH值,並且製膠過程混合要均勻,凝膠時間再拉長

    至於如何做loading control?? 用B-actin與GAPDH就算是loading control了吧~

    希望有回答到你的問題 :)

  • 1 decade ago

    很正常的事

    沒40也沒關係

    說不定你load的maker沒有40的band也說不定

    不是膠跑不開吧

    是蛋白質跑不開吧

    還是你要load的裡面沒東西只有藍色的液體

    你是用站立的還是躺著的呢?

    2009-12-24 20:32:00 補充:

    反正是有時候才沒有

    其他時間都有

    你說的上層膠時間點跟我做的不一樣

    可能跟儀器不一樣也有關係吧

    抱歉~~我不會用control

    要問廠商看看或老師

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