為什麼我做蛋白質電泳時,都跑不開??

Question

求救.....為什麼做Western blot時,膠片常常有跑不開的現象??
Protein Marker 只出現這幾條band--170,130,100,70,55,40{有時候40還會沒有} 是因為膠片製作不好還是因為電泳時間有問題呢??
上膠3.9%{60V 20mins};下膠10%{100V,100mins}

抺奶茶 · Accepted Answer

是Marker在40kDa以下的band都沒有出現嗎???

有否可能是因為跑的時間太長...蛋白質跳海了呢???

不知道你用的是跑小片膠還是大片膠...

看要不要在電泳進行至下層膠在dye離跳海還有1~2公分的距離時就停止電泳

你做western時有再做一片coomassie stain做control嗎? 

如果有coomassie stain做control就可以知道是否40kDa以下的產物是否有在膠片上，如果有出現，就可能是marker的品質不良，請換一個新的試試

照正常情況下以10% acrylamide gel 應該最低到20kDa都可以拉得開

如果蛋白沒跳海  又coomassie stain在40 kDa以下的產物又染不到的話

有可能是膠片沒做好   請check Tris buffer的pH值，並且製膠過程混合要均勻，凝膠時間再拉長

至於如何做loading control??   用B-actin與GAPDH就算是loading control了吧~

希望有回答到你的問題 :)

 · Answer

很正常的事

沒40也沒關係
說不定你load的maker沒有40的band也說不定

不是膠跑不開吧

是蛋白質跑不開吧

還是你要load的裡面沒東西只有藍色的液體

你是用站立的還是躺著的呢?

2009-12-24 20:32:00 補充：
反正是有時候才沒有

其他時間都有

你說的上層膠時間點跟我做的不一樣

可能跟儀器不一樣也有關係吧

抱歉~~我不會用control

要問廠商看看或老師

Trending News

為什麼我做蛋白質電泳時,都跑不開??

2 Answers