3307 asked in 科學生物學 · 1 decade ago

分子生物問答急需!!

Q1.請說明真核細胞的轉錄後修飾與原核細胞的差異?

Q2.請說明細菌的乳糖操作子(Lac operon)受到乳糖與葡萄糖   的調控方式?

Q3.請說明為什麼X-gal可作為遺傳工程「藍白篩選」的化學物   質?

Q4.請說明PCR的原理與PCR的兩種應用?

Q5.請舉出兩種遺傳工程製造出的蛋白質藥物及其用途?

很急著需要   卸卸!!

1 Answer

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  • 志忠
    Lv 6
    1 decade ago
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    PCR...

    指的是real time PCR還是reverse transcription PCR

    real-time PCR的基本原理和一般PCR都一樣

    不同的是,real-timePCR顧名思義就是能夠即時觀測

    原理就是在進行PCR時利用螢光染劑或是一些probe...等螢光技術

    在PCR進行的同時即時偵測螢光訊號,

    即時知道PCR進行的狀況和結果...

    reverse transcription PCR

    是利用PCR放大特定RNA的片段

    作法是先將RNA先進行reverse transcription

    將mRNA翻成cDNA...

    再利用PCR放大特定片段...

    常用來偵測某基因表現情形的技術

    Northern blotting (北方點墨法)

    也是用來偵測RNA表現情形的技術

    作法是進行RNA電泳後

    將gel的RNA transfer到纖維膜上

    再利用設計好和RNA互補的 probe去和RNA進行雜化

    然後偵測probe的訊號...

    希望對你有幫助

    real-time PCR使用的螢光技術

    REAL-TIME PCR絕大多數用的染劑是 SYBE GREEN

    原因是毒性低,敏感性強

    原理是SYBE GREEN是double-strand-specific dye

    在鑲進雙股DNA後發出螢光

    在PCR的過程中,特定片段的雙股DNA數量逐漸擴增

    所以營光強度也會逐漸增強...

    我們在藉由偵測螢光強度的變化來之道特定片段被放大的情形

    而使用probe是專一性更高的方式

    probe大多是用TaqMan system

    原理是再probe的五端在標記欲測的螢光分子

    在probe的3'端標記Quencher dye,

    此Quencher dye 與螢光分子靠近時,

    螢光分子的訊號會被Quencher dye吸收,而沒有螢光訊號發出

    利用teq polymerase 五端外切酶的特性

    而將配對在template上的probe切斷

    使Fluorophore及Quencher dye方開

    而有螢光訊號發出

    另一種probe是Molecular Beacon

    同樣的兩端亦分別標記Fluorophore及Quencher dye

    但probe會產生二級結構

    所以當probe還沒和template配對時

    因為二級結構使Fluorophore及Quencher dye靠的很近

    所以Fluorophore dye 發出的螢光會被Quencher dye吸收

    而沒有螢光訊號

    然而當特定片段放大後,probe和被放大的template配對後

    probe的二級結構打開,Fluorophore及Quencher dye方開

    而有螢光訊號發出

    可以參考

    http://tw.knowledge.yahoo.com/question/?qid=150705...

    to Hibioman:

    要怎麼選擇實驗方法就看你的檢體,擁有的材料,資源,還有你希望如何呈現結果的方式來決定摟

    目前我很少看到有人在用Northern blotting了

    我想有可能是mRNA很少...

    要偵測mRNA所使用的probe往往因為敏感性的關係

    而必須使用一些放射性同位素...所以很少人做摟

    而使用real-time PCR,不僅速度快,而且專一性高...

    而且偵測的敏感性強...

    目前發展到可以偵測到一顆細胞的RNA表現情形...

    data的呈現方式是所有期刊都能接受而且公認的...

    所以大多實驗室都選擇real-time PCR...

    real-time PCR還有一個優點

    就是它可以同時偵測兩個以上的基因表現情形...

    只要probe的螢光種類選的好...是可以同時分析多個基因

    PCR 的原理與方法 原理 PCR是一種使特定DNA片段大量複製的技術。 利用PCR針對基因改造部份的DNA片段進行複製,如 果PCR的結果可以獲得該片斷的複製產物,即代表檢體含有欲檢驗 ... 因此,以一個食品的DNA檢體進行定性PCR,如果可以偵測到某 種外來轉殖基因的特定DNA片段 ...

    標記方法由最初單一的染料法,發展到了特異性更高的探針法 ,如Taqman、Molecular Beacon、Fret等不同方法的標記探針,其中由於Taqm an探針的廣泛使用,實時定量PCR的方法也稱為Tagman法 。 ... 檢測靈敏度高,是一個基於PCR的信號放大檢測系統。 可以準確定量。

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