lalala asked in 科學生物學 · 1 decade ago

RACE PCR

請問各位生物高手~

今天假設我有一小段已知的細菌蛋白質序列,我如何去得到它的完整DNA序列呢?

是不是可以利用RACE PCR???

和degenerate primer 和 cDNA cloning有啥關係?

請高手幫我解答~!!! 越詳細越好!!! 超級感謝~~~

1 Answer

Rating
  • 1 decade ago
    Favorite Answer

    ~RACE PCR與 cDNA cloning有啥關係

    http://e-biolearning.com/bbs/context.asp?id=428

    ~degenerate primers

    當你要的一段序列在NCBI中找不到時,你就只能去搜尋類似物種的相同蛋白質功能序列(基因或是胺基酸序列都是可以的)。

    再來,如果你的基因序列,與一般物種基因序量相似度比較不大的情況之下,

    也較是說序列的保留性比較不高。

    (通常序列中相似的部分,可能只有具功能的部分。)

    (保留性的意思是,序列相同的程度,相似程度越高 保留性越高。)

    (他們會被歸類成為superfamily)但是他們的序列並不會一模一樣

    當你要調出這段code蛋白質的基因時,在primer的設計上就必須要將比較可能產生不一樣的地方做成類似Y、N、R的設計囉

    而Y、N、R各代表的意思如下

    Y:C or T

    R:A or G

    N: C or G or A orT

    製備的話呢 當然是要請專門做primer的公司囉

    例如明新公司

    使用就如同上述

    抽了total RNA轉成cDNA以後

    拿primer釣出全長基因啦

Still have questions? Get your answers by asking now.