sam asked in 科學化學 · 1 decade ago

qPCE 和 real-time PCR的差異

我看的一篇paper,它是用qPCR來放大菌體某段基因,用它來表示菌的數量

qPCR全名是Quantitative real-time PCR,他和real-timePCR不是都用螢光標定來看產物量嗎?有什麼差異?

用qPCR的方法來計算菌數有什麼好處,為什麼要用這方法,不用傳統平板數菌

Update:

請問有沒有什麼網站有詳細介紹操作方法的,我想要更清楚原理

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  • 1 decade ago
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    Quantitative real-time PCR=real-timePCR

    在過去Real-time PCR開始出現的時候,標榜的是他可以即時的偵測每個PCR cycle在反應時所產生的product數目,所以在電腦螢幕上可以看到PCR產物開始上升的cycle數,同時也代表了這個sample的濃度高低(cycle number少代表此sample濃度高)

    後來,在應用一段時間後,Real-time PCR最主要目的就是為了要定量,而且著重於微量,也就是強調這個machine對於"定量"的準確性,因此後來很多人直接以Quantitative real-time PCR來稱之.

    qPCR跟平板數菌來比,好處是: 1. 操作簡單, 2. 所需時間短, 3. 專一性, 敏感度, 準確度高 4. 污染低(不需跑電泳,而平板菌落需滅菌) 5. 當菌量多時,可能會糊成一片或人為數菌導致誤差極高(當然可以做稀釋,只是稀釋同樣存在著準確性問題) 6. 當菌數少時,無法得知到底是少到什麼程度(敏感度)

    ps: 其實第五和第六項都可以歸在第三點

    Source(s): 自己的操作認知
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