Robin asked in 科學化學 · 1 decade ago

請問將DNA由gel萃取出來的問題???

我可以請問一個問題嗎?

通常如果要經由跑膠然後將DNA片段切下來純化

目前大都是由gel extraction kit來操作

但目前本身的實驗室並無此kit

請問有哪些傳統方法可以將dna萃取出來呢???

可以請您告知一個較好的方法及步驟嗎?

謝謝

2 Answers

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  • 文昌
    Lv 7
    1 decade ago
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    請問將DNA由gel萃取出來的問題???

    染色體

    DNA

    分離與檢定

    N1-2

    Biochemistry Laboratory

    的物質則會造成干擾。核酸樣品中最常有的其它吸光物質為蛋白質,因此除了

    測定 A

    260

    外,需同時測定 A

    280

    ,以估計核酸溶液的純度。純化的 DNA 及 RNA

    之 A

    260

    /A

    280

    比值應分別接近 1.8 及 2.0,當溶液中含有蛋白質時,會造成

    A

    260

    /A

    280

    比值降低,在此種狀況下,以此法估計 DNA 的量是不準確的。

    b) Hoechst 33258 定量法:Hoechst 33258 為 bis-benzimidazole 螢光染劑的一種,

    可結合於雙股 DNA 之 minor grooves 上。Hoechst 33258 與 DNA 結合後,對

    365 nm 的光有最大之吸收值,而後在 458 nm 有最大螢光釋出量。由測定螢光

    值,與標準曲線比對後,可得知 DNA 之濃度。此法比測定 A

    260

    方法靈敏,並

    且對 DNA 具專一性。然而,Hoeschst 33258 與小於 1 kb 之 DNA 結合不佳,

    因此在使用上受到限制;此外,此染劑主要結合於 A-T rich 區域,因此 DNA

    中 A-T 的含量也會影響測定的結果。加入 Hoechest 33258 的 DNA 溶液無法再

    回收使用。

    c) Ethidium bromide (EtBr) 定量法:EtBr 可嵌入 DNA 或 RNA 之雙股結構中,吸

    收紫外光後,可釋出螢光。可在樣品中加入一定量的 EtBr 後,測定樣品在 590

    nm 螢光值,與標準曲線比對,由內差法求得 DNA 含量。然而比較常用的估

    計法並非直接測定螢光值,而是將未知濃度樣品 DNA 與數個已知量標準 DNA

    分別與 EtBr 混合後,取等體積點在保鮮膜或 agarose 膠體上,或進行膠體電

    泳後,以 UV 燈照射並觀察比較各樣品之亮度,找出與未知濃度 DNA 樣品亮

    度相當之標準 DNA,此標準 DNA 之量即可視為未知濃度 DNA 樣品之估計

    量。此法常用於 DNA 少而無法測定吸光值或樣品中含有大量會吸收紫外光之

    物質時。

    http://juang.bst.ntu.edu.tw/files%20BCX/BCX-N1%202...

    操作步驟:

    膠片製備:

    1) 每組製備一片 6-well 0.8% agarose gel:秤取適量 agarose 粉末後,加入 1

    TAE(小片 Mupid II 膠片約需 20 mL),以微波爐加熱溶解後,置 55℃水浴

    降溫。

    ◆ 此部分請每大組之第一小組同學統一製備四組的膠體。

    ◆ 鑄膠及電泳等步驟請戴手套操作。EtBr 為突變劑,請小心!

    2) 加入 EtBr(每 50 mL 膠體溶液加一滴 stock solution),混合均勻,將膠體溶

    液倒入鑄膠模,插上齒模,置室溫至少 30 分鐘使凝結。

    準備 DNA 樣品:

    3) 每管染色體 DNA 各取 2 及 10 L 兩種體積,分別置於微量離心管中(請標示

    清楚),各加入 1 L 10追蹤染劑。

    4) 將染色體 DNA 及 Mr (已經加入追蹤染劑) 置 65℃ 水浴 5 ~ 10 min

    後,立即移置冰浴中。

    電泳:

    5) 小心拔開齒模(0.7% 膠片較脆弱,要小心!),將膠片置於電泳槽中,倒入

    1TAE,直至溶液蓋過膠片。

    6) 將各個 DNA 樣品加入樣品槽中,蓋上電泳槽之透明蓋。以 50 V 進行電泳,

    待追蹤染劑 bromophenol blue 行進至膠體三分之二處時,關閉電源,取出膠片,

    以 UV transilluminator box 觀察色帶位置,並記錄結果。

  • 6 years ago

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