Anonymous
Anonymous asked in 科學生物學 · 1 decade ago

Duplex TaqMan PCR的原理?

Duplex TaqMan PCR的原理?

Duplex TaqMan PCR的原理?

Duplex 雙向? 為何稱Duplex ?

2 Answers

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  • VBC
    Lv 7
    1 decade ago
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    PCR的引子基本原理都相同,不是因為一對引子才稱為 Duplex

    這裡的Duplex是指「雙重」。廣義來說是「Multiplex」 real-time PCR :「多重」定量PCR。

    TaqMan real-time PCR是用帶有螢光標記及螢光接受體的探針加入PCR反應。當反應開始前螢光會被接受體吸收能量轉成較長波長或電子。若此探針序列與目標DNA有對應在PCR反應時,探針會被polymerase分解,使標記與接受體分開,這時機器輸入的激發光就可以使螢光標記可被偵測。

    雙重或多重是指在同一檢體中,放入多對引子與多條帶有不同螢光標記的探針。這樣就可以同時偵測多個不同基因型的表現。

    在設計上要注意的是這多條引子與探針的annealing溫度不可以相差太多,以確保反應準確。選用的螢光標記需對應機器可激發與偵測的系統範圍。

    2008-02-13 21:33:43 補充:

    TaqMan是一種用於定量PCR的螢光探針設計方式。其他還有Molecular Beacon等方法,目前以TaqMan最常用。

  • 1 decade ago

    材料:欲放大之DNA模板、足夠的dNTP、DNA聚合酶、足夠的引子

    每次循環的3大步驟:

    1.加熱至攝氏90-95度高溫破壞氫鍵(Denature),使雙股DNA模板分離

    2.降溫至攝氏50-60度使一對一小段的DNA引子接上模板(Annealing)

    3.升溫至攝氏72度(DNA聚合酶作用的較佳溫度)使DNA聚合酶開始延長DNA(Extension)

    4.重複以上步驟,讓聚合酶連鎖反應,達到DNA數量以2的次方放大的效果

    我覺得Duplex應該是因為一對引子是分別黏至雙股DNA模板的3',反向延長至5',所以是雙向。

    以上,希望有幫到您的忙

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