何謂PCR-ELISA!!急

Question

請問什麼是什麼是PCR-ELISA
這是要上台講解的
只是時間很趕
想要網路跟圖書館都有資料一起弄會比較完整
麻煩各位專家帥哥美女幫我一下><""

fish · Accepted Answer

這個問題，首先要解釋一下什麼是PCR了
如果你本來就已經知道的話可以跳過以下這段^^"

PCR 技術其實是非常簡單而直接。它的原理完全仿照自然界DNA 合成的步驟，只是加以自動化而已。基本上，這個技術主要包含三個步驟：DNA 分開(denaturation)、引子煉合及引子廷伸作用。
A. DNA 分開：雙股DNA 可利用高溫加熱而將之分開。當然若是溫度降低，二股DNA 便有機會再結合在一起。
B. 引子的煉合：通常PCR 技術所用的引子均為一對寡核甘酸小片段，每一個引子各自與一股DNA 互補。引子乃是利用DNA 合成儀合成的，其序列是互補於欲進行放大之DNA 片段二端的序列。當進行煉合時，藉著溫度的降低，二個引子各自互補性地結合至其單股的DNA 模板上。結果造成其3'端相對於3'端。由於所加入之引子濃度均很高，故有利於引子與DNA 之間的煉合，而使得DNA-DNA再結合回去的機會大大降低。
C. 引子延伸作用：第三步就是藉著DNA 聚合脢進行合成。由引子處，開始由5'往3'方向，將dNTP 依照模板上的序列，以其互補的核甘酸，逐一接上去，如此就形成了一條新的雙股DNA。其中引子自己亦包含在新合成的DNA片段上。

看一下圖會比較清楚喔
http://www.biocrawler.com/encyclopedia/Image:Pcr.png
還是不清楚的話就看個動畫吧~
http://juang.bst.ntu.edu.tw/BCbasics/images/PCR.gif

那什麼是PCR-ELISA呢
這是一種能定量DNA的方法

簡單的說
是在PCR中引子(primer)的部份接上一個biotin
如此一來PCR產物上都會有一個biotin

接下來將PCR產物放到一個盤子
盤子裡本來就有一層和你PCR產物互補的DNA序列
於是PCR產物就會和盤子裡的DNA結合

洗去不要的雜質後再加入帶有酵素的streptavidin
streptavidin會和biotin結合
洗去雜質後再加入和酵素相對應的受質
一般會是用呈色反應
最後再去讀吸光值就可以算出你原本DNA的量囉~

也就是說
原本DNA量越多=>PCR產物越多=>接上盤子的DNA越多=>留在盤子裡的biotin越多=>和biotin結合的streptavidin越多=>酵素越多=>受質呈色越多=>吸光值越大

如此一來就可以得知DNA的量了

給你個圖參考吧~
http://www.modares.ac.ir/sci/saman_h/images/applic12.jpg

另外
還有一種可以知道DNA含量的方法
real time PCR
報告的時候可以比較一下這兩種喔~
real time PCR雖然比較方便
可是也比較貴啦~題外話了XD

報告加油啦~^^

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