袋鼠 asked in 教育與參考考試 · 1 decade ago

何謂PCR-ELISA!!急

請問什麼是什麼是PCR-ELISA

這是要上台講解的

只是時間很趕

想要網路跟圖書館都有資料一起弄會比較完整

麻煩各位專家帥哥美女幫我一下><""

1 Answer

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  • fish
    Lv 4
    1 decade ago
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    這個問題,首先要解釋一下什麼是PCR了

    如果你本來就已經知道的話可以跳過以下這段^^"

    PCR 技術其實是非常簡單而直接。它的原理完全仿照自然界DNA 合成的步驟,只是加以自動化而已。基本上,這個技術主要包含三個步驟:DNA 分開(denaturation)、引子煉合及引子廷伸作用。

    A. DNA 分開:雙股DNA 可利用高溫加熱而將之分開。當然若是溫度降低,二股DNA 便有機會再結合在一起。

    B. 引子的煉合:通常PCR 技術所用的引子均為一對寡核甘酸小片段,每一個引子各自與一股DNA 互補。引子乃是利用DNA 合成儀合成的,其序列是互補於欲進行放大之DNA 片段二端的序列。當進行煉合時,藉著溫度的降低,二個引子各自互補性地結合至其單股的DNA 模板上。結果造成其3'端相對於3'端。由於所加入之引子濃度均很高,故有利於引子與DNA 之間的煉合,而使得DNA-DNA再結合回去的機會大大降低。

    C. 引子延伸作用:第三步就是藉著DNA 聚合脢進行合成。由引子處,開始由5'往3'方向,將dNTP 依照模板上的序列,以其互補的核甘酸,逐一接上去,如此就形成了一條新的雙股DNA。其中引子自己亦包含在新合成的DNA片段上。

    看一下圖會比較清楚喔

    http://www.biocrawler.com/encyclopedia/Image:Pcr.p...

    還是不清楚的話就看個動畫吧~

    http://juang.bst.ntu.edu.tw/BCbasics/images/PCR.gi...

    那什麼是PCR-ELISA呢

    這是一種能定量DNA的方法

    簡單的說

    是在PCR中引子(primer)的部份接上一個biotin

    如此一來PCR產物上都會有一個biotin

    接下來將PCR產物放到一個盤子

    盤子裡本來就有一層和你PCR產物互補的DNA序列

    於是PCR產物就會和盤子裡的DNA結合

    洗去不要的雜質後再加入帶有酵素的streptavidin

    streptavidin會和biotin結合

    洗去雜質後再加入和酵素相對應的受質

    一般會是用呈色反應

    最後再去讀吸光值就可以算出你原本DNA的量囉~

    也就是說

    原本DNA量越多=>PCR產物越多=>接上盤子的DNA越多=>留在盤子裡的biotin越多=>和biotin結合的streptavidin越多=>酵素越多=>受質呈色越多=>吸光值越大

    如此一來就可以得知DNA的量了

    給你個圖參考吧~

    http://www.modares.ac.ir/sci/saman_h/images/applic...

    另外

    還有一種可以知道DNA含量的方法

    real time PCR

    報告的時候可以比較一下這兩種喔~

    real time PCR雖然比較方便

    可是也比較貴啦~題外話了XD

    報告加油啦~^^

    Source(s): 我,google
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