? asked in 健康疾病與處置癌症 · 1 decade ago

請問 IHC stain的prot的protocol和原理

各位大大:

我想知道IHC stain的protocol和原理,最好有圖示

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  • 1 decade ago
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    免疫組織化學 是指用免疫學原理,通過特異的抗原、抗體反應標記上可見的顯示物系統來檢查細胞及組織上原位抗原或抗體成分的方法。此方法可以識別定位各種細胞組織成分,發蛋白質、多肽、核酸、部分類酯、多糖、激素、病原體(寄生蟲、細菌病毒)、受體、神經介質、腫瘤的標記物(抗原或相關抗原)等,一般認為凡具有抗原性或半抗原性物質都可以用免疫細胞化學方法檢查並顯示出來。在光學顯微鏡、螢光顯微鏡或電子顯微鏡下觀察其性質定位,還可以利用細胞分光光度計、圖像分析儀、共聚焦顯微鏡等進行細胞原位定量測定。

    免疫組織化學技術這種方法具有特異性強、靈敏度高、定位準確和簡便快速等優點,又能夠有機的同形態、功能及代謝的研究結合起來,用以研究其它技術(如化學、生化、免疫及生理等)難以深入的領域。免疫細胞化學對生物醫學基礎研究及預防和臨床醫學的發展,對軍事醫學的應用價值,引起當今世界各國的重視。

    免疫組織化學的概念:

    免疫組化是利用抗原與抗體特異性結合的原理,通過化學反應使標記抗體的顯色劑 (螢光素、酶、金屬離子、同位素) 顯色來確定組織細胞內抗原(多肽和蛋白質),對其進行定位、定性及定量的研究,稱為免疫組織化學。

    免疫組化實驗所用的抗體有哪些?

    免疫組化實驗中常用的抗體為單克隆抗體和多克隆抗體。單克隆抗體是一個B淋巴細胞克隆分泌的抗體,應用細胞融合雜交瘤技術免疫動物制備。多克隆抗體是將純化後的抗原直接免疫動物後,從動物血中所獲得的免疫血清,是多個B淋巴細胞克隆所產生的抗體混合物。

    免疫組化常用的染色方法有哪些?

    根據標記物的不同分為免疫螢光法,免疫酶標法,親和組織化學法,後者是以一種物質對某種組織成分具有高度親合力為基礎的檢測方法。這種方法敏感性更高,有利於微量抗原(抗體)在細胞或亞細胞水平的定位,其中生物素——抗生物素染色法最常用。

    抗體交叉反應的原因:

    指抗體除與其相應的抗原發生特異性反應外還與其它抗原發生反應。產生的原因有以下幾個方面:

    1. 抗原特異性指用於免疫動物的抗原性物質中含有多種抗原分子,它引起動物產生針對多種抗原分子特異性的相應抗體。任何其它物質只要含有一種或多種與上述物質相同的抗原分子,必將與上述多特異性的抗血清發生交叉反應。

    2. 共同決定簇即兩種抗原分子中都含有相同的抗原決定簇。

    3. 決定簇相似,兩種不同的抗原決定簇,如果結構大致相同,由於空間構象關係,某一決定簇的相應抗體可以與大致相同的決定簇發生交叉反應。當然抗原一抗體之間構象相似時的結合力小於吻合時的結合力。

    多抗和單抗特性比較:

    1.均一性。一種單抗中,每個抗體的化學結構和氨基酸順序都相同,只有一種Ig亞類。即單抗是一種純度很高的均一抗體。而從不同動物,不同時期所得到的多抗,各有不同的化學組成。多抗是多種種類和亞類Ig的混合物。

    2. 穩定性。單抗的穩定較差,對PH變化敏感,對熱不穩定,提純過程中易變性,而多抗的穩定性則較好。

    3. 特異性。單抗是單一地針對抗原的某一決定簇,所以用它進行血清學反應時,特異性強,敏感性高,一般不發生交叉反應。而多抗能與抗原上的多種抗原決定簇結合,所以特異性較差,較易引起交叉反應。

    4.重複性。單抗的重複性好,而多抗每批都不一樣。

    5. 沉澱反應。多抗由於與抗原多價結合容易形成網絡樣沉澱,而單抗只與抗原結合產生二聚體,不能直接形成抗原抗體沉澱物。

    免疫組織化學染色

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    Source(s): 網路&自己
  • Anonymous
    6 years ago

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