有沒有人了解螢光染劑 FITC這種東西的??

Question

一般我們在做螢光染色的時後常常使用FITC來標定

例如在抗體上標上FITC

當此抗體抓到他的抗原的時候就可以方便觀察

這是我們目前已經知道的知識

1.但是如果我們是將protein接上FITC

然後讓此protein去跟它的receptor去結合

請問這樣也可以用FITC觀察得到嗎?

2.請問一下細胞會不會uptake free的FITC

我的意思是假如protein與FITC沒有接好的情況下

細胞也沒有可能直接將FITC利用擴散或是胞飲作用將FITC吃進去?

造成我們的誤判結果??

Answer 1

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1.這樣的實驗方法是可行的...

而且市面上已經有kit可以做...

http://www.anaspec.com/pdfs/72059.pdf

protein和FITC是用protein的amine group和FITC鍵結

這和antibody接上FITC或其他螢光probe的原理一樣...

圖片參考：http://www.piercenet.com/media/PD-Figure20.gif

不過進行protein-protein interaction的分析時...

若要在其中一個ptorein上標定probe...要考慮一個問題...

就是當probe標定上protein後,是否會影響protein的正常功能...

意思是說...當FITC接上protein後,是否會影響protein之間的interaction...

這還要做一連串的實驗先證實protein接上FITC後,是否會影響正常功能...

因為protein有三級和四級結構...這樣的結構對protein的功能很重要

有些胜肽鍊的amine group是藏在整個三級結構的內部...

若要和一些probe結合...amine group勢必需要翻到外部來...

這樣有可能影響整個protein的結構和功能...

2.沒錯...細胞是有可能uptake free的FITC..

而影響之後觀察的結果...

所以在合成protein-FITC的過程...

確認接上FITC的效率很重要...

如果太低當然不能用來做實驗...

這和antibody-FITC一樣...若保存不當,或時間過久...

都可能造成FITC從antibody上脫離...

所以實驗前要先確認protein-FITC這樣的complex是否正確...

以免觀察時誤判

你可以參考以下網頁...

http://www.piercenet.com/Objects/view.cfm?type=Pag...

希望對你有幫助

Source(s): 我的小腦袋