我的細菌活性很差該怎麼辦

我的菌從負八十度冰櫃拿出來,養液體培養基長得很好,隔天就很濃了,但是從液體養在平板培養基兩天了都還沒長出來,我養液體培養基每隔一天就再次培養,但是塗在平板培養機上就是沒反應,能否請有經驗的朋友,告訴我該怎麼辦?

Update:

我的菌是營養培養基

完全沒有任何抗生素

以前都可以在相同的培養基上生長

但是現在只能在液體培養基上生長了

液體跟固體的成分完全一樣

請幫忙

Update 2:

我不是要做cloning的菌

所以沒有使用抗生素的問題

我的菌是粉紅色的,我也有用顯微鏡確定過,沒有問題

我的培養基是類似LB,很營養

就算不是我的菌,是被雜菌汙染,也不可能完全沒有菌體生長

所以肯定是我的菌沒有錯

至於活化步驟的話

我已經subculture好幾次了

但是都還是液體長得出來

固體長不出來

Update 3:

我的agar濃度幾乎都是1.5%

就算兩次配的有差別

但也不可能差到哪裡去吧

所以依照你說的

就很難知道為何固體長不出來囉

4 Answers

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  • 1 decade ago
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    @@

    細菌很難長不出來,除非是要特殊環境條件的

    會長不出來可能是主要細菌族群死了

    你看到很濃那很可能是雜菌增生

    我只能猜你第一次液態沒加抗生素

    不然不可能第二次看不到(兩次都不加藥隨便養都會有雜菌阿@@)

    所以會再你平板培養基(我猜有加藥)養兩天都養不出來

    培養細菌的時候不管液態或是固態培養都會添加抗生素(實驗用)

    抑制雜菌增生,讓主要實驗用的細菌族群強大

    先建議鑑定一下你養出來的細菌到底是不是你要的

    因為有可能早就污染卻都不自知

    由於-80度保存的細菌要給她們比較長的時間恢復

    所以我選擇用兩階段培養,目的為喚醒他們的活性

    因為我看不懂"養液體培養基每隔一天就再次培養"<==到底是啥?

    會不會跟我說的一樣就不知道了,而我的方法是將-80度的細菌先做小量活化,讓細菌過夜,隔天把小量活化的細菌,在一次轉到更大的液態培養基,再過夜,隔天再做平板,嘗試看看,過去我從-80拿出的細菌不太會直接馬上就用做實驗,需要活化一下

    ^Q^

    而細菌保存方法以前分為-80跟-20兩種

    -20為應付實驗常態性工作

    -80是保存重要菌種使用

    也因為-80的細菌需要較長的活化程序,才有較好的活性可以做實驗,-80極度寒冷的情況下,要好好照顧細菌讓他先睡醒比較人性

    啦XD

    總結:

    1.檢查細菌是不是你要的那種

    2.用活化手段去活化細菌

    2007-11-22 14:24:32 補充:

    1. 培養基的所有藥粉是不是有異?潮濕發霉,且台製怪牌跟大廠牌品質有差。

    2. 你先前也做活化了,而似LB平板培養基都長不出來(要不要放他曝曬一天?亂養也該污染),考慮更換更肥的培養基作作看,以LB為例,可以選用2XYT培養基,與LB成分雷同,就是tryptone、yeast extract變多。我LB養不好的時候,會換這個更肥的配方,因為你說你的是似LB的培養基,就以LB為例,依照你所選用的同款培養基去看看有沒有更肥的可以選擇去用。

    3.既然你已經確定主要菌OK沒錯,那就更換配方看看

    2007-11-22 14:24:54 補充:

    P.s配方:

    2xYT

    • 16 g tryptone

    • 10 g yeast extract

    • 5 g NaCl

    • Water to 1 litre

  • 1 decade ago

    所謂擴散速率是神麼意思

    我曾經做過pour plating也就是取100ul菌液與20ml agar medium混合

    但結果神麼都沒長

    我的推測可能是菌的活性不夠好

    所以只能在液體中生長

    在固體中因為菌量較少相對含有活性夠好的菌就不多

    因此看不到生長跡象

    所以我會使用濃度兩倍三倍的培養基試試看吧

  • 1 decade ago

    用傾注平板試試

    2007-12-04 21:24:22 補充:

    給你回信當中所說營養元素缺乏也有可能是過多導致抑制

    至於 液體長得好 agar長不好 應該可以想像是因為擴散的速率導致的吧

  • YCP
    Lv 5
    1 decade ago

    妳的菌是哪隻

    帶什麼抗藥性基因

    用的broth and agar是哪一種

    加了什麼antibiotic

    請稍加說明

    2007-11-20 20:06:00 補充:

    我唯一想到的可能就是

    你的菌

    不適合長在agar上

    我們在檢驗一些細菌時

    有時候會針對細菌的生化和生長特性做培養

    既然你不是要做cloning

    那我認為你的菌株應該是適合再半固態或是液態培養基中生長的菌株

    如果你的配方沒錯的話

    至於你說以前可以在agar上生長

    其實這很籠統

    要是你以前都配置大約0.8%的agar

    而現在都配置1.2%的agar

    那對細菌的生長就有差

    2007-11-20 20:07:06 補充:

    還有...你的很濃指的是什麼

    要是你濃到一堆都是死菌

    那當然也subculture不出來

    2007-11-22 00:57:27 補充:

    那就把agar的濃度降低

    另外

    我本來在想你用的medium到底能不能長

    很多菌落的培養需要特殊的培養基

    如果你確定用你的配方能長

    培養基的成分也沒有問題

    那我能想到的就是你的agar太硬了

    Source(s): , MT
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