金令 asked in 科學植物學 · 1 decade ago

我的southern blote 好失敗阿~救命啊

我們需要剪水稻的葉子來抽DNA篩選是否有我們要ㄉ那一段殖入ㄉ基因~純化DNA後會將DNA定量滴在24WELL裡用真空transfer到膜上~將膜泡在鹼性ㄉ溶液denaturl再用uv固定-跑hybridization用DIG

可是跑出來ㄉ結果都不理想.連control都出問題..請問是什麻原因

造成~?

還有用真空抽ㄉ時候不知道為什麻滴進去ㄉdna很容易擴散開來?~

是否有什麻方法可以改進ㄉ或是提供別ㄉ方法?

因為我們是要大量作篩選植物..所以跑膠ㄉ話可能會太慢

很抱歉剛接觸分昇ㄉ新手要是說ㄉ不夠專業請多包涵

麻煩請幫我回答上面ㄉ3ㄍ問號喔!感激不盡!!

Update:

我們ㄉ老闆(博士)他要我們自己解決問題,可是真ㄉ不知道問題在哪裡 ><"..control和probe都是他給我們ㄉ..我在想應該不會有很大ㄉ問題才是..

礙於實驗是資源缺乏沒有96ㄉwell..

有試過把dna直接滴在乾燥的膜上..後來學姐跑完hybridization..control有跑出來..他是說postive有出來...

不過還是很感謝妳們哦~^^

2 Answers

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    1. 『連control都出問題..』

    分生實驗最怕污染,妳的control都出問題的話,恐怕實驗步驟你要再熟練熟練。參考看看:Denaturl、UV固定、hybridization時間加長一點。

    2. 『dna很容易擴散開來?~』

    先找出southern blotting kit的說明書,再讀讀看唄! 試用hybridization solution 潤濕後再滴入DNA。

    3.『方法可以改進ㄉ或是提供別ㄉ方法?』

    強烈建議:請教實驗室學長姊,會得到實際的幫助。妳問的問題太簡單,通常答案會很複雜、很難理解。

    Source(s): 自己分生實驗經驗、Molecular cloning 2ed
  • Anonymous
    1 decade ago

    你用24well 做 Dot Blot喔~ 太大了啦~

    用 96 well 做 Dot Blot 比較好

    而且一次做96個Sample

    因為 24Well ‘面積太大 抽真空時 容易漏氣 抽氣不足

    這樣就會造成DNA的擴散

    Control 跑不出來 原因很多 可能 Hybridization 不完全

    或是 pH值不對 或是 DIG 有問題

    可先滴一滴在膜上乾燥後 測試一下

    如果已經知道DNA序列 可以用PCR 測呀~

    96Well PCR 再跑Gel 一天就可以做完96個Sample

    還可以再跑Blotting 確認

    ^_^

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