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關於PCR或RT-PCR...

想請問..

用RT-PCR檢測病毒時,病毒濃度高的會把濃度低的給競爭掉.....把它吃掉.....所以跑電泳時,病毒濃度低的就不會出現亮帶…這是什麼意思?是什麼原理呢?有沒有比較專業的說法或專有名詞?

3 Answers

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  • gene
    Lv 5
    1 decade ago
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    當然不是把它吃掉了,所以在gel上看不到...

    而是含量太少了,偵測不到,或是本來就沒有

    不論是RT-PCR或PCR的基本原理都是利用DNA 聚合酶(DNA polymerase)和引子(primer)放大DNA的特定片段...

    PCR放大過程是先昇溫至95℃

    使DNA雙股分開...

    接著降低溫度...溫度視primer決定,一般大約為50℃-65℃之間

    這是為了使primer和DNA的其中一股配對...

    接下來再將溫度升高至72℃...這是DNA 聚合酶作用的溫度

    目的是使DNA在primer之後開始合成...

    以上這樣的溫度變化,先95℃,再來50℃-65℃,最後72℃...

    這是一個PCR循環(cycle)...一次PCR反應一般大約30至40個循環...

    理論上每一個循環PCR的DNA片段會增加2倍...

    經過40個PCR循環...DNA片段會是原來的"2的40次方"倍

    也就是1099511627776 倍...

    從原來只有1個copy...經過40個cycle...理論上會變成1099511627776個copy...

    然後再用DNA dye如 EtBr或SYBR green增測DNA含量...

    所以你試著想想...

    比如說我有兩個sample...

    第一個sample裡病毒表現的mRNA只有1個copy,甚至沒有病毒...

    第二個sample裡有感染病毒,病毒大量表現出病毒的mRNA...

    比如說有100個copy...

    如果我們進行RT PCR...放大病毒的特定片段...

    進行30個cycle後...

    第一個sample裡倍PCR放大的病毒特定片段可能是2的30次方,或是沒有PCR產物...

    第二個sample就變成100再乘於2的30次方....

    然後再DNA dye偵測時...

    因為DNA dye敏感度的關係...

    第二個sample的訊號就會遠大於第一個sample...

    可用這個實驗方式來比較DNA的含量,gene的表現亮量,或病毒量等...

    PCR的全名是polymerase chain reaction,中文是"聚合酶鏈鎖反應"

    RT-PCR是real-time PCR...即時聚合酶鏈鎖反應...

    你可以參考以下動畫會比較清楚...

    http://gmo.doh.gov.tw/web/images/flash/pcr.swf

    希望對你有幫助

    Source(s): 我的小腦袋
  • Anonymous
    7 years ago

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  • 7 years ago

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