微生物實驗之革蘭氏染色的問題

一、各試劑之功用及理論?

二、為何革蘭氏染色法,在微生物學上經常被用,而且很重要?

三、革蘭氏陰陽性是否恆定?

麻煩知道的大大可以回答,

不管回答幾各都可以。 

謝謝

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  • 1 decade ago
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    革蘭氏染色為鑑別染色法中最常見者,藉染色結果可區別革蘭氏陽性菌及陰性菌,是重要的分類依據之一。

    一般鑑別染色需用經熱固定之抹片,且連續使用三種化學藥劑。最初試劑是所謂初染劑,其目的使細菌著色。為形成顏色對比,第二試劑為脫色劑。依細胞化學組成之不同,脫色劑可完全除去初染或僅除去部份細胞構造之顏色。最後試劑是謂複染劑,與初染呈對比顏色。脫色時若初染未洗去,則複染不能吸收,細胞與其組成將保留初染顏色。若初染脫色,則細胞組成即吸收複染之對比顏色。因此細胞之形成或其構造,可依保留之染色劑而鑑別之。

    用於細菌學上最重要之鑑別染色法是謂革蘭氏染色。此法乃微生物分類與鑑別之主要工具,可將細菌區分為兩大組,即革蘭氏陽性菌與革蘭氏陰性菌。本法使用四種不同試劑,茲將其作用機轉分別簡述如下:

    初染劑:初染劑乃結晶紫,係步驟中最先使用之試劑,使細菌染成紫藍色。

    媒染劑:乃革蘭氏碘液,可與初染劑結合而形成不溶性複合物。所形成之結晶紫-碘(CV-I)複合體藉以加強染料顏色,此時所有細菌均成紫黑色。

    脫色劑:乃95%乙醇,此試劑具有脂溶性與蛋白質脫水劑之雙重功能。其作用依微生物細胞壁所含脂肪濃度而定。格蘭氏陽性菌之脂質含量低乃保留CV-I複合體之主要因素因少量之脂質經乙醇作用,立刻溶解,形成細胞壁之細孔,但此細孔隨即因乙醇之脫水作用而封閉,以致緊密結合之初染劑不易移去,終於保留紫色。革蘭氏陰性菌細胞壁中之外層含高量之脂質,易為乙醇溶解,形成大孔。即使引起細胞壁蛋白之脫水也不易封閉該孔,因此有利於CV-I複合體之釋出,致使菌體成無色。

    複染劑:最後試劑為番紅,凡經上述脫色之細菌,被此染料染成紅色。因僅革蘭氏陰性菌發生脫色,故於此步驟能吸收複染劑。革蘭氏陽性菌則保留初染時之紫色。

    至於是否保持恆定,我不知道你要問的是不是這個(即受干擾而造成誤差):

    染色時,脫色步驟可影響抹片之製備成敗與否。切記脫色過度時可使初染流失,使革蘭氏陽性菌成革蘭氏陰性菌。但脫色不足,則不能完全除去CV-I複合物,結果是革蘭氏陰性菌成革蘭氏陽性菌。

    宜使用未超過24小時之新鮮培養,置備抹片。因菌齡老化,尤以革蘭氏陽性菌易失去保留初染之能力,而顯示出錯誤的結果。且部份菌體染呈紫色,部份呈紅色。

    資料來源:http://www.scu.edu.tw/microbio/proj/charact/stain/...

    Source(s): 東吳大學微生物系及沒學好微生物學的自己
  • 1 decade ago

    革蘭式染色的目的主要是再分辨細胞壁的組成 可作為選用抗生素的依據

    陽性呈藍紫色 陰性呈紅色

    至於第三題:陰陽性是否恆定? 我個人認為 如果有發生突變使細胞壁的組成發生改變 才會導致革蘭氏染色的結果改變

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