生化題目(幫幫忙拜託了)!!急!!!!!!

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請問

1.請簡述PCR反應之操作原理與過程,並舉例說明PCR之用途

2.請簡述Southern blotting反應之操作原理與過程

3.請簡述RT-PCR與Real-time PCR反應之操作原理與過程兩者的差異

4.請簡述Gene Knock-out,Gene Knock-down兩者之間差異

5解釋SiRNA,RNAi,Antisense並舉例說明在生物科技上之應用

6解釋Ti plasmid,並舉例說明在生物科技上之應用

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謝謝你

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  • 1 decade ago
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    1.請簡述PCR反應之操作原理與過程,並舉例說明PCR之用途

    PCR的反應包括三個主要步驟,分別是1). Denaturation 2). Annealing of primers, and 3). Extension of primers。

    所謂 Denaturing乃是將DNA加熱變性,將雙股的DNA加熱後轉為單股DNA以做為複製的模板. 而Annealing 則是令 Primers於一定的溫度下附著於模板DNA兩端。 最後在DNA合成酵素 (e.g. Taq-polymerase) 的作用下進行引信的延長及另一股的合成 (Extension of primers)。

    在醫學上對遺傳疾病或腫瘤癌症的診斷及預後的評估;對細菌、病毒及黴菌感染的診斷。它也可成為一個生產線進而大量複製特定的基因進行基因密碼的讀取 (DNA sequencing) 及其他的運用。舉凡對生物標本及法醫學上的樣本鑑定,從單一毛髮、一隻精蟲或一滴血液、唾液來找出兇手。也可以做DNA指紋(Fingerprints) 比對幫助親子關係的鑑定。PCR更可以用於器官移植組織相容性HLA的分析。另外在演化上的分析,經由PCR的運用也產生重大的進展。近來,在生物醫學的研究上,特別是細胞間訊息的傳遞分子,諸如介白質 (Interleukines) 及各種生長因子 (Growth factors) 基因的表現都可用PCR來進行質與量的分析。

    2.請簡述Southern blotting反應之操作原理與過程

    DNA 經過限制 處理,再以電泳分離後,可轉印到硝化纖維紙上;然後以標有放射性的小段 DNA 為探針,進行混成雜合反應,可以挑出其中具有互補關係的 DNA 片段。

    過程:http://web.ncyu.edu.tw/~jgtsay/jg4-12-7a.html

    3.請簡述RT-PCR與Real-time PCR反應之操作原理與過程兩者的差異

    在RT-PCR中,一條RNA鏈被逆轉錄成爲互補DNA,再以此爲模板通過PCR進行DNA擴增。由一條RNA單鏈轉錄爲互補DNA(cDNA)稱作「逆轉錄」,由依賴RNA的DNA聚合酶(逆轉錄酶)來完成。隨後,DNA的另一條鏈通過去氧核苷酸引子和依賴DNA的DNA聚合酶完成,隨每個循環倍增,即通常的PCR。原先的RNA模板被RNA酶 H降解,留下互補DNA。

    Real-time PCR:是一種在PCR反應過程中同時可以偵測PCR反應增幅情形與增幅趨勢的技術,利用偵測PCR反應之增幅趨勢,可以計算出檢測樣品中,目標DNA的含量。其基本原理就是在進行『聚合連鎖反應』(Polymerase Chain Reaction, PCR) 時,也同步偵測定量其核酸產物。

    差異:Real-time PCR可以即時偵測核酸產物,RT-PCR則不會。

    2007-05-27 17:29:09 補充:

    5解釋SiRNA,RNAi,Antisense並舉例說明在生物科技上之應用

    一些短片段的雙鏈RNA能夠使特定的mRNA降解,藉此阻斷此基因的表現,此一作用機制稱為 RNA 干擾現象 (RNA Interference, 簡稱 RNAi)。

    2007-05-27 17:29:29 補充:

    siRNA (Small Interfering RNA) 就是這種短片段雙鏈RNA分子,能夠以與序列同源互補的 mRNA為標靶,降解特定的mRNA

    Antisense mRNA is an mRNA transcript that is complementary to endogenous mRNA. It is the noncoding strand complementary to the coding sequence of mRNA.

    2007-05-27 17:29:46 補充:

    6解釋Ti plasmid,並舉例說明在生物科技上之應用

    Ti plasmid:這是一種土壤瘤痂桿菌中特有的細菌性質體,其上有特殊的致病基因,可藉由細菌感染而進入植物細胞,造成植物的腫瘤生成。

    2007-05-27 17:30:29 補充:

    Ti質體上有調控本身複製的基因、vir基因、chv基因及與opine有關的基因等,除此之外Ti plasmid上還有另一段特殊的DNA序列稱為T-DNA(transferred DNA)可以經由蛋白質作用轉入感染植株的基因體內,在自然情況下轉入植株基因體後T-DNA上的基因會促使轉殖的細胞分泌適合農桿菌生長的生長素(Auxin and Cytokinin)及營養物質(Opine)

    2007-05-27 17:30:48 補充:

    應用:雖然T-DNA主要利用於植物基因工程居多,但可以利用T-DNA轉殖的細胞並不單侷限於植物,從原核到真核,從微生物、酵母菌、真菌、高低等植物到動物都可以利用T-DNA將來自其他生物的一段基因轉入目標基因體中,在功能基因體學興起之後,利用T-DNA所做的基因釣取與基因標定等研究也日益增加,因此對T-DNA的分子基礎以及其運作模式的了解的研究也就日趨重要。

    2007-05-27 17:31:44 補充:

    第4題我查不到= =||

    希望對你有幫助~

    2007-05-27 17:32:50 補充:

    內容有點雜,可以再自行簡化~

    Source(s): 網路, 網路
  • 7 years ago

    到下面的網址看看吧

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  • 1 decade ago

    knock-down 是降低基因表現

    knock-out 是使基因不表現

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