Anonymous
Anonymous asked in 科學生物學 · 1 decade ago

Southern blotting的主要步驟

Summarize the major steps that are involved in Southern blotting.請簡單扼要喔 謝謝 ~~

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  • 陳皓
    Lv 6
    1 decade ago
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    Southern blotting是檢測某特定DNA片段的方法,於1975年Edward Southern首先提出,故名之。在一個混合的DNA樣品中,可以藉核酸互補的專一性,設計一段特定的核酸序列作為探針,此探針可專一的與欲檢測 DNA互補,而探測出該DNA片段是否存在或分析相對大小的檢測技術,稱為Southern blotting。

    其主要步驟如下:

    1. Preparation of restriction fragments

    分離出 genomic DNA後,以特定限制酶處理,而形成方便分析的DNA片段。

    2. Gel electrophoresis

    以電泳法分離DNA片段。

    3. Blotting technique

    (1) 將凝膠至於鹼性溶液,使DNA變性成單股 (才能與探針互補);

    (2) 將凝膠架高置於blotting paper上,blotting paper的兩端須浸泡於 buffer 中;

    (3) 在 Gel上放置一張 membrane filter (一般是醋酸纖維或 nylon membrane),

    (4) 以毛細作用的吸附原理,將 gel的 DNA轉移到 membrane上。

    (5) 完成Southern blotting technique後,此單股 DNA以 UV crossing linking或

    80度C的烘箱烘烤至少2小時,以固定 DNA於membrane 上。

    4. Hybridization with radioactive probe

    (1) 將 membrane 與碳針溶液密封於塑膠袋中,於適當溫度下進行雜交。

    (2) 清洗 membrane 以移除未結合的碳針序列。

    5. Autoradiography

    探針的放射線對X-膠片的感光效應,所形成的黑色電泳帶,即為DNA所在。

    很多的檢測技術,如RFLP analysis,DNA指紋分析等,

    都是應用上述的 southern blotting而完成的。

    [註]:寫著 寫著----,又不禁想起數十年前實驗室的點滴,時間好快啊,

    同學們要好好把握時間。

    By Dr.陳皓

    Source(s): www.e-biolearning.com (E-流生化教育網提供)
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