Anonymous
Anonymous asked in 科學生物學 · 1 decade ago

<分生>nucleosome positioning

如題看原文書有點一知半解請高手解答希望圖文並茂喔謝謝 ~~ ^^

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  • 陳皓
    Lv 6
    1 decade ago
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    一、Nucleosome positioning (核小體定位)的意義:

    染色體的微觀結構是一條大約10 nm的念珠狀構造 (beads on a string)。

    其中八元體的組織蛋白被DNA纏繞而形成球狀單位稱為核小體 (nucleosome)。

    因此在不同的細胞中,就某一特定的DNA鏈而言,

    這些核小體單位究竟是在特定的位置上或是任意隨機的位置上形成?

    若是特定的位置形成核小體,那表示不管哪個細胞,該 DNA鏈上的某一段落,

    始終是一定的包裝結果,亦即:

    若是 linker DNA則每個細胞的該DNA段落永遠是linker DNA;

    若是 core DNA 則不論何種細胞,該段落一定是形成核小體,

    這種特定的DNA組織方式 (particular organization)即稱為 nucleosome positioning

    (或稱為 nucleosome phasing)。

    目前解釋核小體定位的機制有二:

    1.內在因素:是指DNA序列本身的因素,

    特別的序列(尤其是AT rich) 比較容易彎曲 (bending) 而包裝八元體結構。

    2.外在因素:是指其他蛋白質可能與特定的DNA序列結合,

    自然會限制 (或引導)核小體的形成位置。因此就以這些蛋白質為邊界,

    從這裡開始每一定 linker DNA的間隔形成核小體。

    二、核小體定位的証明:(indirect end labeling method)

    利用兩種核酸酶,

    一為MNase (micrococcal nuclease, 微球菌核酸酶):

    MNase不具專一性,只要是linker DNA的部份就被砍。

    (因為linker DNA沒有蛋白質保護,較易被核酸酶破壞)。

    另一為 restriction enzyme(RE, 限制酶):

    辨認特定的序列而切割,當然你必須已知該限制位置附近的特定序列,

    以便設計探針 (Southern blotting用的)。

    1.若核小體定位:

    則每個細胞中,限制位到MNase切割位間的距離都是一樣的,

    經southern blotting檢視DNA片段,可得到清晰的 (唯一的) 電泳帶(band)。

    2.若核小體非定位:

    則不同細胞,其限制位到MNase切割位間的距離,可能各不相同,

    因此 southern blotting所得的電泳帶為一模糊的寬帶,

    (因為不同細胞切出來的長度不同)。

    利用兩種酵素 (micrococcal/restriction double digest) 處理 DNA,

    然後以southern blotting電泳法,

    檢視這兩個切割位間的距離是否一定的技術稱為indrect end labeling technique。

    [註]:寫著寫著----進入忘我的境界,差點忘記上課時間。

    Gene 8 應該有適當的圖,可以看到電泳帶的結果。祝同學讀書愉快。

    By Dr.陳皓

    Source(s): www.e-biolearning.com (E-流生化教育網提供)
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