Iris
Lv 4
Iris asked in 科學化學 · 1 decade ago

HPLC~mobile phase的選擇

有篇文獻上說有一個樣品以二氯甲烷處理並萃取後的萃取液必須以HPLC分析,而且以Hexane+1% 異丙醇當mobile phase我ㄉ問題是..樣品既然以二氯甲烷處理,為什麼不以二氯甲烷當mobile phase而是以Hexane+1% 異丙醇當mobile phase?有什麼特殊道理嗎 ?

Update:

好難懂喔

UV cut-off 是什麼??

2 Answers

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  • Yy
    Lv 7
    1 decade ago
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    樣品既然以二氯甲烷處理,為什麼不以二氯甲烷當mobile phase??1. 雖然樣品可溶於二氯甲烷 但是以其當mobile phase不一定能將樣品分開 樣品中所有化合物可能同時全都一起出來 正相層析原理是樣品被固定相(stationary phase eg. silica gel)吸附 以移動相mobile phase 洗脫 因不同化合物與固定相的吸附能力及被移動相溶劑洗脫(溶解度)不同 相互競爭 因此不同化合物分開而分離 所以mobile phase 通常用較非極性的2. HPLC 不用二氯甲烷當mobile phase 是因為其有UV吸收 此為UV cut-off   二氯甲烷的UV cut-off在 232nm 即在以小於232nm 偵測流洗物eluent時二氯甲烷的吸收會蓋住化合物的吸收 同理乙酸乙酯也很少用  UV cut-off在 256nm hexane的UV cut-off在 195nm 而isopropyl alcohol的UV cut-off在 210nmHPLC solvent properties:http://home.planet.nl/~skok/techniques/hplc/eluotr...

    2006-08-11 11:26:31 補充:

    UV cut-off 是什麼?? 即溶劑本身也吸收UV 如二氯甲烷在 190-232nm 波長下仍吸收 則二氯甲烷的UV cut-off 為232 nm

  • mark
    Lv 5
    1 decade ago

    樣品已經溶在二氯甲烷裡了,在用二氯甲烷當移動相,我猜當初制定方法的人有試過,你的想法是這樣就不會有溶劑的干擾峰出現是吧!但是事實可能是他可能無法與樣品分開,也許會造成重疊或根本不分離,導致你無法辨別。我記得大學中曾學習層析方法,他有個三相圖,要選擇極性....(其實忘了差不多了),反正就是分析物、移動相、管柱三者之間的關係,我們要用的是最佳分離條件,今天你看到的方法應該是經過前人試驗後,用的時間最短,分離效果最佳的條件,當然也可能不是,可能你要花時間去做,按照條件的原則,去改變移動相、流速、梯度、溫度、甚至管柱更換也可以,這樣回答你的問題可以吧!

    Source(s): 工作經驗
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