Anonymous
Anonymous asked in 科學生物學 · 2 decades ago

關於細菌的問題

一、請問我器材和原料不用滅菌釜滅菌,

我把器材和原料擺在無菌操作台上可滅菌嗎?

二、我以為調配培養基的比例用量不一定要很準確也無所謂,對不對呢?

三、我如何保存一株菌並且不斷複製呢?

以上問題若只知道其中之一,也可以回答喔,謝謝!

Update:

回答越詳細越好喔,謝謝!

Update 2:

適當的空間及營養液就可以繁殖

這個我知道喔~~

我想問的是比較完整的作法

Update 3:

例如要如何保存菌種不讓它變種(存放的環境、方法等)

1 Answer

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  • 2 decades ago
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    2. 其實我覺得每一種實驗,所定的一些標準,是有他一定的道理,這些都是前人所研究出來的,養分太多太少對於你培養出的菌落,就會有一定的影響(做實驗不能隨隨便便)

    給你一些參考資料,還有這裡(http://sunrise.hk.edu.tw/~jhguo/cosmicro/w5.pdf#se...

    要用Adobe Reader檔案一點大資料較完整

    細菌單菌落分離與過夜菌液之培養

    I. 單一菌落(Single colony)之分離:

    儀器用具:

    1. 酒精燈

    2.接種環

    藥品試劑:

    1. Escherichia coli K-12菌株:JM109

    2.LB agar plates:1 ﹪(w/v)Bacto-tryptone, 0.5 ﹪bacto yeast extract, 1 ﹪NaCl,以5 N NaOH調至pH 7.0後,加入1.5 ﹪(w/v)bacto agar,以濕熱法滅菌。

    方法步驟:

    1.每一組取一個LB plate,在培養皿底部標明組別及日期,並寫上菌株編號:如“JM109“。

    2.將接種環在酒精燈火燄上燒紅,環上方部份亦以火燄燒過。另一手將長有JM109之培養皿蓋子拿起 【注意!蓋子請勿全開或置於實驗桌上!接種環請勿放置在桌上或接觸到其它東西!】,將接種環在培養基空白處輕戳數次以使冷卻。

    3.以接種環輕輕沾取(刮下)菌落,並將培養皿蓋子置回。

    4.打開空白的LB plate,將沾有菌落的接種環於其上輕輕連畫數條線(如圖1.4 之Streak 1)後,將培養皿蓋子置回。

    5.再次將接種環在酒精燈火燒紅並使冷卻。將培養皿旋轉約60度,畫第二次線(如圖1.4之Streak 2)。

    6.重複上一步驟之操作,畫第三次線或第四次線(如圖1.4之Streak 3, 4)。

    7.將接種環在火燄上燒紅滅菌後方可置回實驗桌上。

    8.將培養皿倒置,於37 ℃培養箱中培養過夜。

    Streak 1 Streak 2 Streak 3

    圖1.4. Streak-Plate Method.

    II. 過夜菌液(overnight bacterial suspension culture)之培養:

    儀器用具:

    1. 酒精燈

    2. 接種環

    藥品試劑:

    1. Escherichia coli JM109菌株

    2. LB 培養液:1 ﹪(w/v)Bacto-tryptone, 0.5 ﹪bacto yeast extract, 1 ﹪NaCl,以5 N NaOH調至pH 7.0後,以濕熱法滅菌。

    3. LB agar plates:LB培養液中添加1.5 ﹪(w/v)bacto agar。

    4. kanamycin (ampicillin)

    方法步驟:

    1. 每一組應有一支15 ml離心管,裝有2 ml LB培養液,請寫上菌株編號並標明組別及日期。

    2. 每一裝有2 ml LB培養液之螺旋試管,於接種前先添加20 μl kanamycin。

    3. 將接種環在酒精燈火燄上燒紅,環上方部份亦以火燄燒過。同上述方法步驟2之操作,使接種環冷卻並刮下菌落,將培養皿蓋子置回。

    4. 打開離心管蓋(一手握住離心管,以拿著接種環的手的小指旋開蓋子),將管口在酒精燈上過火。將沾有菌落的接種環伸入培養液中並輕敲管壁使菌落脫離。將管口再次在酒精燈上過火後,將蓋子置回。

    5. 將接種環在火燄上燒紅滅菌後置回實驗桌上。

    6. 將離心管蓋稍微旋開,以膠帶固定管蓋以避免震盪培養時蓋子鬆動掉落。

    7. 將離心管置於37 ℃ 培養箱或水浴中震盪培養過夜。

    8. 將長有E. coli菌株之培養皿交回給助教。

    【請注意:與細菌接觸過的任何容器或培養基,使用後必須經過滅菌才可丟棄。實驗中若不小心被菌液濺到,請用大量清水沖洗,並以70 ﹪酒精消毒。桌面或地面有菌液翻覆時,請以10 ﹪漂白水擦拭清理。】

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