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小寶 asked in 科學生物學 · 2 decades ago

破碎細胞的方法有那些

一般在做基因工程時,有那些破碎細胞的方法阿?

那些方法有什麼優缺點嗎?

我想要找一種破碎細胞又不會破壞蛋白質的方式,最好的方法是什麼呢?

謝謝唷^^

Update:

可以再詳細一點嗎,^^

我想破碎的原理比用什麼儀器來的重要多了吧?

畢竟破碎細胞是看不到的,誰也不能保證用這個儀器會造成什麼樣的結果,@@

3 Answers

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  • Anonymous
    2 decades ago
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    打破細胞的方法可以分為非機械式和機械式兩大類。非機械式有溫度、壓力改變、特殊酵素或化學物質等形式。而機械式則有超音波、剪力或高壓衝擊等形式(6-8)。表二列出各方法的優缺點。一般而言,非機械式打破細胞較具特異性,但在大量操作時須考慮其他問題如:成本(如用酵素方式),加入物之處理(如用化學物質方式)。若要大量打破細胞仍是以珠粒磨碎機和高壓均質機方式為多。若為了考量機械操作時之熱轉換和操作時間問題,我們亦可結合非機械式,如pH或溫度改變,使得部份細胞壁組織變弱再進行機械式之完全細胞打破,如此機械操作次數及操作壓力皆可降低

    表二、各種打破細胞方法的優缺點

    原 理 形 式 優 點 缺 點 應 用實 例

    溫度 ‧ 高溫、低溫‧操作簡單、便宜 ‧ 蛋白質可能失活 ‧ 動物細胞

    冷凍/解凍

    滲透壓 ‧ 滲透衝擊 血球細胞

    酵素 ‧ 溶解酵素 具專一性 大量操作成本貴 ‧ 細菌

    、水解酵素‧

    化學物質 ‧酸、鹼‧ 具專一性 ‧ 蛋白質可能失活 ‧細菌

    ‧有機溶劑 加入化學物質的後續處理‧酵母菌

    超音波 ‧振盪(sonicator) ‧ 機器緻密 ‧ 熱轉換不易 Pseudomonas

    ‧大量操作不易

    剪力磨碎‧旋轉均質機 ‧冷凝效果好 ‧操作滯留時間長 ‧酵母菌、孢子

    (homogenizer) ‧破碎效率佳

    ‧珠粒磨碎機

    (Dyno-Mill)

    高壓 ‧French press‧ 操作滯留時間短‧ ‧熱轉換不易 E.coli

    高壓均質機‧ 破碎效率佳

    ‧衝擊 (impinge) ‧易放大

    http://www.mc.ntu.edu.tw/becgm/download/%AB%E1%B0%...

    細胞收集及破碎設備

    1. 連續式高速離心機

    High performance centrifuge Beckman 連續式離心操作

    2. 高壓細胞破碎儀

    Constant cell disruption system B.BraunConstant System one shot 利用高壓破碎細菌、酵母細胞

    (1.) 具夾層可通冷卻水控制溫度

    (2.) 具多重安全保護設計

    (3.) 出口堵塞時,內部安全閥會自動打開 ‚破碎頭安裝不正常時,無法啟動

    洩漏的樣品可收到安全的地方(Secondary pressure containment),不流外面造成污染及危險

    (4) 可做連續或批次(小於30ml時)破碎

    (5)液態或高黏稠sample均可用

    3. 超音波細胞破碎儀

    Ultrasonic homogenizer B.Braun

    Labosonic U 利用超音波破碎細菌、酵母細胞

    4. 撞擊式粉碎機

    Laboratory ball mill B.Braun Micro-Dismenbrator U 利用震動磨碎酵母菌、真菌類細胞

    http://www.ym.edu.tw/excellence/GBBR/l8.html

    Source(s): 因為格式的問題..所以表怪怪的...你可以去下載pDF會看的更清楚
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  • 除了震碎,也可用溫和的清潔劑或較強的清潔劑把細胞膜分解

    • Commenter avatarLogin to reply the answers
  • 2 decades ago

    突然想到一個方法,用低滲透壓的方法撐破細胞,再用離心機分層取樣。但是不是每個細胞都適用。如果要用其他方法,我大概只會想到細胞均質機,但是破壞蛋白質的機率似乎也不低。(我還沒用過)

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