miles asked in 科學生物學 · 2 decades ago

何謂 RNAi ?

何謂 RNAi ?

其應用上為何?

可否舉個例子?

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  • Anonymous
    2 decades ago
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    近年來的研究發現,一些短片段的雙鏈RNA能夠使特定的mRNA降解,藉此阻斷此基因的表現,此一作用機制稱為 RNA 干擾現象 (RNA Interference, 簡稱 RNAi)。siRNA (Small Interfering RNA) 就是這種短片段雙鏈RNA分子,能夠以與序列同源互補的 mRNA為標靶,降解特定的mRNA。

    目前市面上研究 RNA 干擾現象的方法很多,大列可以區分成二大類: 第一種為 In vitro 合成 siRNA,在將 siRNA 送入細胞中達到 Gene Silencing 的作用,另一種方法為 送入帶有 RNA Polymerase III Promoter 的序列至細胞中,於細胞內進行大量表現 siRNA。

    我們將一一介紹每種方法的特色以及其優缺點,在 Rev. 4-1將首先介紹給大家知道的是本公司所代理的 pSUPER RNAi System。

    pSUPER RNAi System 介紹:

    由Oligoengine所提供的 pSUPER RNAi System 是針對人類細胞設計用來表現siRNA的載體,pSUPER RNAi System 使用 H1 RNA polymerase III promoter 可以有效的在哺乳動物細胞中形成hairpin siRNA,抑制target gene的表現可以長達數個月。

    pSUPER RNAi System 提供二種適用於哺乳動物細胞篩選用的抗生素篩選基因,分別為 Neomycin Resistance Gene & Puromycin Resistance Gene,並且利用 PGK (phosphoglycerate kinase) Promoter 進行表現 Neomycine/Puromycine Resistance Gene,並且於fusion protein downstream有SV40 polyadenylation signal , 使所表現的fusion protein於哺乳動物細胞中更加穩定。

    由 pSUPER RNAi System 衍生改良的 pSUPERIOR RNAi System,pSUPERIOR RNAi System 為 Tetracyclin (Tet) Regulated Expression Vectors,此調控系統衍生於 E.coli Tn10-encoded Tetracycline (Tet) Resistance Operon,可以利用Tetracyclin調控 siRNA的表現。

    pSUPER RNAi System 的優點:

    1. 在細胞內可以表現大量且穩定的siRNA

    2. 可以持續表現siRNA長達數星期

    3. 提供 pSUPERIOR RNAi Inducible System,可以持續表現siRNA長達數個月

    4. 提供 Neo/EGFP Fusion Protein,方便進行篩選

    pSUPER RNAi System 的缺點:

    1. 操作較繁瑣 , 需先進行tempalte synthesis , ligation , transformation ,

    plasmid purification , sequencing , transfcetion

    詳細產品資料下載

    詳細產品說明書下載: pSUPER RNAi System pSUPERIOR RNAi System

    Source(s): 奇摩搜尋
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    Lv 7
    2 decades ago

    生物:科學上的聖杯--RNA干擾 (RNAi) 編輯:Frank 在發育生物學的研究中,常於線蟲(C. elegans)、果蠅或酵母菌,用來"沈默"特定基因的方法—RNA干擾(RNA interference,簡稱RNAi) 技術,可以有效的應用於抑制HIV病毒的感染與複製上。 RNA干擾現象(RNA interference ,簡稱RNAi),在1998年首度於線蟲中發現,利用雙股的RNA(dsRNA)並將其送到細胞中後,dsRNA會被一種名為Dicer的酵素分解成許多小片斷。這些小片斷的RNA(Short interfering RNA,簡稱siRNAs)結合到特定序列之RNA上,引發RNA序列的降解,使mRNA 無法轉譯蛋白質,造成該特定基因"沈默 (gene silencing)",失去功能。 美國費城的Thomas Jefferson 大學生化暨分子藥理研究所Roger J. Pomerantz博士指出:目前,科學家們才剛意識到,將這項新穎的技術,應用於疾病治療上,可能具有莫大的潛力;更令人興奮的,在AIDS的治療上,RNA干擾可能成為對抗HIV病毒感染、複製的最有利方式。Pomerantz博士的評論文章與麻省理工學院生物化學家、1993年若諾貝爾生理醫學獎得主Philip Sharp博士研究團隊的發現-「siRNA-directed inhibition of HIV-1 infection.」,一同發表在2002 年7月份的國際知名期刊「自然醫學」(Nature Medicine)上。 從Philip Sharp博士研究團隊的發現證實,無論是針對病毒感染細胞所須的病毒 -CCR5共同受體-CD4,或是針對病毒基因組的gag區域,siRNA都可以有效的將病毒與細胞的基因"沈默,抑制HIV病毒的感染與複製能力;Sharp博士認為: siRNA能在哺乳動物細胞發揮作用,短短的21個核甘酸可能是重要原因之一,因為不會刺激干擾素的產生,破壞siRNA的作用。Pomerantz博士強調:"RNAi 在哺乳動物細胞也適用嗎?那將是科學上的聖杯!",他進一步提到科學家在幾十年前即已經知道,生物體(線蟲、果蠅甚至植物)能關閉特定基因的表現,只是沒有人知道基因沈默 (gene silencing)的發生機制。現在,科學家們已經明白,經由降解基因的RNA的方式,可以阻斷基因複製與表現特定蛋白產物。 Pomerantz博士指出:麻省理工學院Philip Sharp博士研究團隊的發現,是了解 siRNA基因沈默機制的重要一步,也流露出siRNA對抗HIV的莫大潛力。但是,在細胞內,siRNA可以持續多久、會在細胞間傳播嗎?抑制HIV病毒感染與複製的能力有多強?可以應用於所有的RNA病毒嗎?siRNA對致癌基因的影響又是如何?Pomerantz博士也有許多的疑問,須要更多的研究來驗證。

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