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asked in 餐廳與小吃台灣其他料理 · 2 decades ago

關於酵母菌?

關於酵母菌?他是什麼東西?而是怎樣製作!??

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  • Lv 7
    2 decades ago
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    酵母菌(Saccharomyces cerevisiae)是一種很有用的真核生物,他擁有生物的特性,可用原核生物的方式培養,其基因組較小,複製時間短,可作為基因分析,在分子生物學研究上的突破,很多都是以它為材料。在工業上酵母菌也很重要,例如:啤酒、麵包、酒、重組胜和蛋白質之合成皆與酵母菌有關。  在重組DNA技術中,酵母菌(yeast)乃是一種很重要的寄主生物,可用質體DNA為媒介物引入外來DNA並表現之。轉型技術與大腸桿菌相似,但其方法需修飾以瓦解其細胞壁,常用的兩種方式進行酵母菌的轉型作用,一是使酵母菌形成Spheroplast,此法較麻煩需將細胞壁去掉,另一種是用鹼性陰離子(例如:LiCl或RbCl)加上熱休克快速地處理完整的細胞,本實驗用後者來實行,收集對數生長期的酵母菌細胞,經鹼性陰離子及熱休克處理,可使細胞外鞘發生變化,有利於吸收質體DNA,正如大腸桿菌一樣(參照實驗5),不同的因子會影響效率,質體DNA吸收能力與質體的大小、DNA的構形、寄主品系、篩選步驟有關,與大腸桿菌的轉形作用相比有顯著的差別是轉形效率,酵母菌的轉型效率在每1 mg質體DNA中,約可獲取103-104轉形細胞。II.酵母菌的培養1.儀器用具:a. 30 ℃恆溫箱b. 酒精燈c. 接種環2.藥品與試劑:a. yeast 菌株:EGY48〔MAT a, ura3, his3, trp1, LexAop(x6)-LEU2〕YM4271〔MATaura3-52, his3-200, lys2-801, ade2-101, ade5, trp1-901, Leu2-3,112, try1-501, gal 80Dgal 4Dade5::hisG〕Y187〔MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-901, Leu2-3,112,gal4D, gal 80D, cyhr2, LYS2::GALUAS-HIS3TATA-HIS3, URA3::GAL1UAS-GAL1TATA-LacZ〕Y190 [MATa, ura3-52, his3-200, ade2-101, lys2-801, trp1-90, leu2-3, 112, gal4D,gal80D, cyhr2, LYS2::GAL1uas-HIS3TATA-HIS3, URA3::GAL1uas-GAL1TATA-lacZ]b. YPD培養液、培養基(參照實驗4)3.方法與步驟:1)單一菌落(single colony)之分離,請參照實驗4。分別將酵母菌養於YPD培養液或培養基中,至於30 ℃之培養箱中約3-5天。2)隔週實驗前,取出酵母菌落並觀察。 III.酵母菌轉形作用1.儀器用具:a. 30 ℃培養箱b. 離心機c. 乾浴器d. 冰浴2.藥品與試劑:a. minimal synthutic dropout(SD)base agar(clontech)b. –Urac. 1 x TE/LiAc(0.1 M LiAc in TE溶液)d. 40﹪PEG4000e. DMSO3.方法與步驟:1)製備勝任酵母菌的前一天,接種酵母菌EGY48於3 ml YPD培養液中,置於30 ℃恆溫箱中振盪培養(230-250 rpm)過夜。2)準備10 ml YPD培養液,加入300 ml過夜菌液,使OD600 = 0.4~0.6。3)在室溫下以2,200 rpm離心5分鐘,倒去上清液,加入5 ml水懸浮酵母菌。4)在室溫下以2200 rpm離心5分鐘,倒去上清液,加入新鮮的100 ml 1 x TE-LiAc懸浮。5)加入0.1~0.5 mg p8OP-LacZ質體DNA及0.1 mg片段精子DNA攜帶者。6)加入600 ml PEG-LiAc(0.1M LiAc, 40﹪PEG in TE)混勻,置於30 ℃恆溫箱中振盪培養(200 rpm)30分鐘。7)加入70 ml DMSO,混勻並熱休克42 ℃ 15分鐘,迅速至於冰浴中2分鐘。8)在室溫下以14,000 rpm離心5秒,倒去上清液,以100 ml TE懸浮並塗   於SD/-Ura培養基中,置於30℃恆溫箱中3~5天。 

    圖片參考:http://www.ndhu.edu.tw/~life-science/exp/pic/Exp23...

  • 2 decades ago

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